附件7
液液萃取/气相色谱氮磷检测器法定量分析
食品、血和尿样品中氟乙酰胺和毒鼠强
1 适用范围
用于定量测定食品、血和尿样品中毒鼠强和氟乙酰胺。
2 原理
使用液液萃取对样品前进行前处理，然后将处理后样品定容，并经过毛细管柱分离，氮磷检测器对其中组分氟乙酰胺和毒鼠强进行测定，通过氟乙酰胺、毒鼠强标准品的保留时间以及标准曲线来进行定性和定量检测。
3 方法重要参数
3.1 线性范围：(5～50)μg/ml。
3.2 精密度：批内、批间RSD≤10%。
3.3 准确度（回收率）：80%～90%。
3.4 全程测定时间：120min。
4 器材与试剂
气相色谱仪（配置氮磷检测器)；非极性毛细管气相色谱柱（HP-1）；振荡仪；离心机；微量加样器；吹氮仪
毒鼠强标准、氟乙酰胺标准
5 操作步骤
5.1 色谱条件
a) 色谱柱：HP-1交联石英毛细管柱30m×0.32mm i.d.×0.25µm。
b) NPD检测器温度:280℃,进样口温度:230℃,载气恒流模式0.7ml/min, 空气流量:60ml/min,氢气:3ml/min。程序升温:初始温度150℃,保持2min,以10℃/min升温至250℃,并保持5min。
5.2标准曲线的配制
吸取1.0mg/ml的氟乙酰胺、毒鼠强标准溶液1.0ml于10.0ml容量瓶中,用乙酸乙酯定容至刻度,此液氟乙酰胺、毒鼠强的含量分别为100μg/ml,将混合标准液逐级稀释为5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml,分别取1.0μg注入气相色谱仪测定,以保留时间定性确证。
氟乙酰胺和毒鼠强的保留时间分别为2.36min和8.72min左右。
5.3样品前处理
5.3.1固体(米、面、馒头、蔬菜等)
取适量样品(15～30)g,加无水硫酸钠研磨呈粉末状,置于150ml带塞锥形瓶中,加入50ml乙酸乙酯,用超声波清洗器提取20min或振荡1h过滤,滤液于40℃水浴浓缩至1ml～2ml。
5.3.2饭、菜汁、洗胃液、呕吐物等
取适量样品(15～20)g置于锥形瓶中,加50ml 乙酸乙酯,超声提取或振荡,乙酸乙酯层通过无水硫酸钠过滤,于水浴浓缩至1ml～2ml。
5.3.3病人血清、尿液
取适量样液(血清0.50ml,尿液500μl)于具塞离心管中,加5ml乙酸乙酯,振摇提取3min,于3500rpm/min下离心分层,水相再次用5ml乙酸乙酯萃取1次,合并2次萃取的有机相,浓缩至0.5ml。吸取1.0μL进行色谱仪分析。保留时间定性，峰面积定量。
6 质量控制
6.1 空白对照样色谱图上没有保留时间与氟乙酰胺和毒鼠强相同的峰。
6.2 进待测样品前必须进空白样或乙酸乙酯溶剂，以确认进样针和色谱仪器系统未受污染。
6.3 样品分析则在相同检测条件下,如在相同保留时间出现色谱峰,可进一步在样液中加入定量标准液,同一保留时间出现峰叠加即可判定为阳性结果。
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