发热伴血小板减少综合征实验室检测方案

为保证及时、科学地采集、运送发热伴血小板减少综合征病例（包括疑似病例标本），规范发热伴血小板减少综合征的实验室检测程序，提高检测质量，特制定本方案。

一、样本采集对象

发热伴血小板减少综合征病例（包括疑似病例，以下同）。

二、标本种类及采集方法

（一）血清标本。用无菌真空管，采集患者急性期（发病2周内）和恢复期（发病4周左右）非抗凝血5ml，及时分离血清，分装保存于带螺旋盖、内有垫圈的冻存管内，标记清楚后将血清保存于-70℃冰箱（一周内可保存在-20℃冰箱），用于病毒特异性核酸、抗原和抗体检测及病原体分离。

    编码规则：“年份（2位）-乡镇级地区编码（8位）-流水号（3位）”。地区编码可通过中国疾病预防控制中心网络直报系统查询。如2010年云南省昆明市五华区沙朗乡的第12位调查者的编码为“10-53010220-012”。该调查者的急性期和恢复期血清分别在编号首位增加“J”和“H”。如上例调查者的急性期血清编号为J10-53010220-012，恢复期血清编号为H10-53010220-012。

（二）必要时，可采集病例的活检或尸检标本进行实验室检测。具体方法参照病理实验室相关要求和卫生部《传染病人或疑似传染病人尸体解剖查验规定》。

    三、实验室检测和诊断

（一）病原学。1．核酸检测：采用RT-PCR 和Real-time PCR病毒核酸诊断方法进行检测和诊断，患者血清中扩增到特异性核酸，可确诊新型布尼亚病毒感染。

2．病毒分离：用于病毒分离的患者急性期血清标本经处理后，可采用Vero、Vero E6等细胞或其他敏感细胞进行，用Real-time PCR病毒核酸诊断方法、ELISA、免疫荧光等方法确定。患者血清中分离到病毒可确诊。

（二）血清学。1. 血清特异性IgG抗体：采用ELISA、免疫荧光（IFA）抗体测定、中和试验等方法检测，新型布尼亚病毒IgG抗体阳转或恢复期滴度较急性期4倍以上增高者，可确认为新近感染。

2.血清特异性总抗体：可采用双抗原夹心ELISA法检测，血清病原特异性总抗体阳性表明曾受到病毒感染。

    四、生物安全

生物安全按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关规定要求，做好生物安全工作。

（一）实验室生物安全。加强实验室生物安全，应当在生物安全Ⅱ级及以上的实验室开展标本的血清学、核酸检测和病毒分离工作。

（二）标本采集个人防护。采集病人标本时可进行一般性防护（穿戴口罩、手套和长袖工作服）。野外采集标本时，应穿着颜色明亮的防护服，并将衣袖或裤管口扎紧以防蜱叮咬人体。一旦发现有蜱附着体表，应当用镊子等工具夹取，不要用手直接摘除。野外作业或活动的人员可使用驱避剂喷涂皮肤。